Protéines à façon
Applications
Nos services s’adressent aux sociétés biopharmaceutiques, aux sociétés du secteur diagnostic et aux laboratoires académiques. Nous proposons des solutions pour la production de protéines recombinantes pour de multiples applications :
- protéines cibles pour la validation de cibles, le criblage à haut débit, l’optimisation de lead
- protéines pour études fonctionnelles ou structurales (cristallographie, RMN)
- antigènes pour la génération d’anticorps
- protéines réactifs pour le développement de tests diagnostic
- protéines et anticorps thérapeutiques pour les phases de preuve du concept
Gamme de services
Pour chaque nouveau projet qui nous est confié, nous établissons un programme de travail répondant aux attentes du client et articulé autour de jalons et de livrables clairement définis.
Ces programmes peuvent intégrer une partie des services décrits ci-dessous ; cependant, cette liste n'est pas exhaustive et une proposition sur-mesure sera réalisée pour chaque projet.
Etude de faisabilité
Pour déterminer le meilleur système d’expression et définir les conditions optimales pour l’expression de votre protéine
Construction de vecteur d'expression à façon
Spécificités
- Vecteurs d'expression pour de multiples systèmes : E. coli, L. lactis, P. pastoris, S. cerevisiae, cellules d'insecte, cellules de mammifère
- Design de vecteurs sur mesure : choix du promoteur, du terminateur, optimisation de la fusion transcriptionnellle, de l'initiation de la transcription, amélioration de la stabilité, prise en compte des contraintes de propriété industrielle
Description
- Design de la construction
- Clonage
- Synthèse et optimisation de gène
- Construction du vecteur
Essais d'expression
Spécificités
- Etude simple ou multi système : E. coli, L. lactis, P. pastoris, S. cerevisiae, cellules d'insecte, cellules de mammifère (transfection transitoire, transduction rétrovirale)
- Large panel de paramètres critiques testés afin d'optimiser l'expression de votre protéine
- Première estimation du rendement d'expression
Description
- Construction du vecteur d'expression approprié
- Essais d'expression : de multiples paramètre seront évalués (souche/lignée, milieu, température, cinétique,...)
- Détermination du rendement : une production et une purification d'affinité à petite échelle (protéines tagguées) seront réalisées et le rendement sera évalué par analyse sur gel SDS-PAGE
- Un échantillon de protéine sera livré pour validation par le client
Développement de lignée mammifère
Génération de lignées exprimant des protéines eucaryotes ou des anticorps monoclonaux
Développement de lignée mammifère
Spécificités
- Flexibilité dans le choix de la cellule parentale (CHO, HEK293, COS…)
- Transfection classique ou transduction rétrovirale
- Amplification génique avec le système DHFR
Description
- Construction du vecteur d’expression approprié
- Transfection ou transduction de la lignée cellulaire
- Amplification génique
- Criblage de clone
- Etudes de stabilité
- Banque cellulaire
Développement du process de production
Optimisation du procédé de production afin d’améliorer le rendement
Culture microbienne
Spécificités
- Optimisation des conditions de fermentation par l'identification des paramètres critiques du process
- Définition d'un process robuste, reproductible et transférable à grosse échelle
Description
- Développement de stratégies de production en batch, fed-batch, chemostat ou perfusion :
- Optimisation du milieu
- Optimisation de la température
- Optimisation du « feeding »
Culture animale
Spécificités
- Optimisation des conditions de culture par l'identification des paramètres critiques du process
- Définition d'un process robuste, reproductible et transférable à grosse échelle
Description
- Adaptation des lignées à la culture en milieu sans sérum et en suspension
- Criblage de milieux
- Développement de stratégies de production en batch, fed-batch, chemostat ou perfusion
Développement du process de purification
Mise au point d'un schéma de purification ayant des performances optimisées en terme de rendement et répondant à vos exigences de qualité du produit final.
Développement du process de purification
Spécificités
- Développement d'un procédé de purification sur mesure pour répondre aux requis qualité du client
- Multiples stratégies de purification disponibles : chromagrographie, filtration, solubilisation des corps d'inclusion et renaturation
- Définition d'un process robuste, reproductible et transférable à grosse échelle
Description
- Développement des étapes de capture, purification et polishing
- Développement des conditions de solubilisation et de renaturation si la protéine est exprimée en corps d'inclusion en E. coli
- Livraison d'un rapport incluant les protocoles détaillés
Production de lots
Production de matériel pour vos études.
Production de lots
Spécificités
- Production selon protocole développé par GTP ou reproduction d'un protocole transféré par le client
- De l'échelle du milligramme à l'échelle plusieurs dizaines de grammes de protéine
Description
- Expression en flasques ou bioréacteurs : jusqu'à 300L pour la culture microbienne, jusqu'à 50L pour la culture animale
- Purification
- CQ
- Livraison d'un certificat d'analyse de lot